树突状细胞（DC细胞）与T细胞的相互作用在肿瘤治疗中至关重要。研究表明，骨髓来源的DC细胞（BMDCs）能够诱导产生CD103+CD8+组织驻留记忆T细胞亚型，从而增强生殖道局部肿瘤的控制能力。同时，半乳糖酸的阻断进一步提升了BMDCs诱导抗原特异性CD8+T细胞增殖的效果。全转录组基因表达分析结果显示，仿硅酸处理后的BMDCs能够诱导与T细胞活化、细胞粘附和细胞间相互作用相关基因的差异表达。细胞聚类分析和单细胞亲和力测定表明，糖基化减少的BMDC与CD8+T细胞之间形成了更强的亲和力相互作用。在DC细胞完成抗原呈递后，它在CD8+T细胞的激活和靶细胞的杀伤过程中发挥的协作功能以及调控机制，尤其是活化CD8+T细胞的记忆功能的变化，与其细胞内的乳酸化、棕榈酸化及相关代谢过程的关系，成为当前研究热点之一。这些研究几乎都需要评估CD8+T细胞的杀伤能力，本期将为大家提供DC细胞活化后CD8+T细胞的评估及杀伤功能检测的解决方案。

实验原理简介

DC细胞是已知功能最强的抗原呈递细胞（APC），其能够摄取和消化外源抗原并将其装载到MHC分子中，从而向CD4+和CD8+T细胞呈递以激发免疫反应。共培养DC细胞与CD8+T细胞是模拟体内CD8+T细胞激活的最佳方法，因此在CD8+T细胞相关研究中，这种模型制备方案不可或缺。当表达抗原肽-MHCⅠ复合物的DC细胞与CD8+T细胞共培养时，CD8+T细胞通过其表面的T细胞受体（TCR）与DC细胞的抗原肽-MHCⅠ复合物结合并被激活。活化后的CD8+T细胞（也称为细胞毒性T细胞）可通过释放溶解介质（如穿孔素和颗粒酶）对靶细胞进行杀伤，或者通过与靶细胞Fas受体（CD95）结合，触发Caspase-8的激活，从而直接启动靶细胞的凋亡程序。

实验结果展示

在DC细胞的体外培养和促成熟中，通过流式细胞术检测C57小鼠骨髓细胞分化为成熟DC细胞的效果发现，经过促成熟的诱导培养后，MHCII/CD80/CD40/CD86的表达显著升高。

CD8+T细胞的分选及激活培养方面，采用EasySort™MouseCD8+TCellIsolationKit从C57小鼠脾脏中分选CD8+T细胞，并使用流式细胞术分析细胞纯度。随后，将使用灭活的靶细胞（Raw2647）抗原装载DC细胞和分选的CD8+T细胞共培养72小时，检测CD8+T细胞的增殖。此外，通过流式细胞术检测增殖后的T细胞与靶细胞（Raw2647）按照1:10的比例共培养24小时后靶细胞中Caspase3酶活性的变化结果显示，共培养组的Raw2647细胞Caspase3激活比例显著增加至7944%。同时，通过ELISA检测细胞培养上清中细胞因子的表达，结果显示共培养组的IFN-γ、IL-2和TNF-α表达均明显增高。

实验方案与操作流程

在DC细胞的体外培养与促成熟过程中，取小鼠骨髓细胞，使用分化培养基培养6天后，再使用成熟培养基培养24小时以获得成熟的DC细胞，详细操作请参考“MouseBoneMarrow-derivedDendriticCells(BMDC)InductionandIdentificationKit”（货号：XJM003）。接着，将Raw2647细胞进行80℃水浴加热灭活处理4小时后离心洗涤，并使用1640全培养基重悬细胞并计数。

将灭活处理的Raw2647细胞与成熟的BMDC以1:1的比例共培养24小时，收集细胞后进行离心，去上清并重悬细胞计数。随后，取C57小鼠脾脏细胞进行研磨处理，使用EasySort™MouseCD8+TCellIsolationKit进行细胞分选，并检测分选后CD8+T细胞的纯度。在分选后的T细胞中，加入CFSE染色液标记，37℃染色5分钟后终止染色，洗涤并重悬计数。将CFSE标记的T细胞与BMDC以10:1的比例均匀混合，并在6孔板中培养72小时。同时设置单独的CFSE标记T细胞为Control组，每24小时补加半体积的1640全培养基。

最后，靶细胞（Raw2647）在24孔板中接种，将T细胞与靶细胞按照2:1的比例混匀，37℃培养24小时后，收集细胞沉淀并使用PBS洗涤，加入Caspase3流式底物和ElabFluor® Violet450抗小鼠CD8a抗体共染，流式细胞仪分析CD8阴性靶细胞（Raw2647）的Caspase3酶活性。

本实验方案全程使用尊龙凯时相关产品，主要产品包括MouseBoneMarrow-derivedDendriticCells(BMDC)InductionandIdentificationKit（货号：XJM003）、EasySort™-5Magnet（货号：EC001）、EasySort™MouseCD8+TCellIsolationKit（货号：MIM003N）、以及ElabFluor®Violet450抗小鼠CD8a抗体（货号：E-AB-F1104Q）等，各类细胞因子ELISA试剂盒也可供选择。关于更多的实验细节或者产品咨询，请随时联系我们的技术支持团队！