尊龙凯时推出的本产品是一款基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒,具有以下显著特点:
产品特点
1. 即开即用:用户只需提供样品DNA模板,方便快捷。
2. 高灵敏度:经优化的引物等组分,灵敏度大幅提升。
3. 阳性对照提供:此检测盒提供阳性对照,帮助用户有效区分假阴性样品。
4. 高特异性:引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域,避免与其他生物样本DNA的交叉反应。
5. 适用范围广:本产品不仅适用于定性检测,亦可用于定量检测,定量检测时线性范围至少达到5个数量级。
6. 高产量:本试剂盒可支持50次20μL探针法荧光定量PCR反应。
7. 科研专用:本产品仅限于科研使用。
操作方法
1. DNA提取
根据自选方法提取并纯化样品DNA,本试剂盒与市场大多数核酸提取试剂盒兼容性良好。
2. 稀释标准曲线样品
请在独立区域内进行以下稀释操作,以避免样品或本试剂盒其他成分的污染:
- 标记6个离心管,编号为7、6、5、4、3、2。
- 在每个管中加入45μL DEPC-H2O (建议使用带芯枪头)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照,充分震荡1分钟以获得1×107拷贝/μL的标准样品。
- 依此类推,逐步稀释,并放于冰上待用。
3. 试剂配制
准备N+2个qPCR管(N个待检样品 + 1个阴性对照 + 6个阳性对照),按说明书中的指示向每个PCR管中添加相关成分。
4. 添加模板
在qPCR管中分别加入2μL模板,添加顺序为阴性对照(DEPC-H2O)、待测样品模板及阳性对照,离心30秒后立即进行扩增反应。
5. 扩增反应
将PCR管置于PCR扩增仪器的样品槽中,执行扩增程序,具体操作请参考详细说明书。
6. 结果分析
若制作标准曲线,以阳性对照浓度的log值为横轴,Ct值为纵轴,绘制标准曲线以推算样品DNA浓度。未制作标准曲线时,根据以下标准判定结果:
- 阳性对照:Ct值<30,明显呈现S型曲线。
- 阴性对照:Ct值38或无Ct值,无明显指数增长。
- 样本结果:Ct值<35,结果为阳性;Ct值38或无Ct值,结果为阴性;Ct值在35-38范围需复检。
运输及保存
本产品应在低温下运输,储存于-20℃,有效期为1年。阳性对照需单独存放,避免污染其他试剂。
选择尊龙凯时的检测试剂盒,为您的生物医疗研究提供可靠支持。