随着分子检测技术的持续进步,甲基化qPCR和甲基化NGS检测已成为广泛应用的检测手段。这两种检测技术的核心步骤是甲基化转化,主要可分为亚硫酸氢盐转化和酶法转化。在近年来,基于DNA甲基化位点的检测试剂盒相继获得批准上市。根据NMPA的审批,绝大多数甲基化检测试剂盒采用荧光PCR法,原因在于这种方法操作简便,无需电泳,并且具备高灵敏度、强特异性和良好的重复性等优点。这些检测试剂盒大多采用亚硫酸氢盐转化法,该方法已成为DNA甲基化检测的“金标准”。然而,传统的亚硫酸氢盐转化存在诸多局限性,例如较长的转化时间、严重的DNA损伤、对5mC水平的高估以及C-U转化的不完全等问题。
甲基化检测技术在疾病早期筛查中持续获得关注。2024-2025年,NMPA批准的甲基化检测试剂盒包括:思博士®MT-1A、Epo及Septin9基因甲基化检测试剂盒(PCR荧光探针法),该产品于2024年8月7日获得批准,由博尔诚(北京)科技有限公司研发,旨在通过测定外周血中的肿瘤DNA特定位点的甲基化程度,提供食管癌的高效筛查;人CDO1和CELF4基因甲基化检测试剂盒(PCR-荧光探针法),于2024年12月17日获批,由北京起源聚禾生物科技有限公司研发,用于定性检测宫颈脱落细胞中CDO1和CELF4基因的甲基化水平。
此外,艾思宁®KCNA3和OTOP2基因的联合检测试剂盒(荧光PCR法)于2025年1月21日获批,由武汉艾米森研发,通过实时荧光PCR技术检测血液ctDNA中的OTOP2和KCNA3基因的甲基化程度,以实现食管癌的早期检测;人Twist1/Vimentin基因甲基化检测试剂盒(荧光PCR法),由江苏为真生物医药技术股份有限公司研发,主要针对尿路上皮癌;GNB4和Riplet基因的联合检测试剂盒(荧光PCR法),由武汉艾米森生命科技有限公司研发,专注于肝癌检测。
2024年1月2日,芝加哥大学的何川教授团队在《Nature Biotechnology》上发表了题为“Ultrafast bisulfite sequencing detection of 5-methylcytosine in DNA and RNA”的研究论文,提出并开发了一种快速且准确检测DNA和RNA上5-甲基胞嘧啶修饰的测序方法,称为UBS-seq。这种新技术相较于现有转化反应进程加速20-30倍,同时显著降低了DNA的损伤和因C-U转化不完全导致的背景干扰。
在传统BS转化技术的不足之处与Superfast BS-seq的优势上,传统方法的转化液浓度低,反应时间长,约3小时,且在高GC DNA区域转化不充分,DNA易降解,非甲基化区域先降解;而Superfast BS-seq则提高了转化液浓度,缩短转化时间至约5分钟,并且降低了DNA降解程度,样本的完整性也得以良好保护,GC区域的转化率高,假阳性率低。
基于这一技术开发的尊龙凯时Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit(柱式)和Hieff® Mag Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit(磁珠法),可在98°C下仅需5分钟即可完成超过99.5%的胞嘧啶转化,极大降低了DNA损伤,从而更好地保障了DNA片段的完整性,整个BS转化流程可在约30分钟内完成,转化后产物适用于PCR扩增和DNA测序等后续应用。
在产品推荐方面,Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit和Hieff® Mag Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit是针对单细胞甲基化建库的理想解决方案,可以在微流控的自动化单细胞DNA甲基化平台上进行,其中单细胞DNA转化率达到约99%。通过这些先进的技术与产品,尊龙凯时致力于为生命科学和精准医疗领域提供高效可靠的解决方案。