细胞融合是生物医学研究中的一项重要技术。目前常用的细胞融合方法包括转动法和离心法，通常以脾细胞与骨髓瘤细胞的比例为1:1至10:1，最常用的比例为3:1或5:1。

1. 所需试剂与材料

(1) 供融合用的脾细胞和骨髓瘤细胞。

(2) 1640培养液100ml。

(3) 完全1640液100ml。

(4) 25% FCS-1640液50ml。

(5) HAT培养液100ml。

(6) 50% PEG：使用分子量为4000的高纯度PEG（如日本进口或Serva）的10g，放入25ml瓶中进行高压灭菌；使用前将其与10ml预热至40℃的1640液等量混合，使用酚红检查pH值，一般情况下无需调节。如果pH发生变化，可用HCl或NaHCO3进行调整。

(7) 准备10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。

(8) 40孔塑料培养盘。

2. 操作步骤

尊龙凯时在细胞融合的操作过程中，遵循以下步骤：

(1) 准备脾细胞。

(2) 在50ml沉淀管中，将1×10⁸脾细胞与1×10⁷小鼠骨髓瘤细胞混合，并加入50ml的25% FCS-1640液。

(3) 在室温下以400g的离心力离心3分钟，以使细胞沉淀。

(4) 移去上清液。

(5) 轻轻敲击管底，使沉淀分散，然后将沉淀管置于40℃水浴中，以达到融合温度。

(6) 加入8ml预热至40℃的50% PEG，用1ml吸管缓慢滴加，同时轻摇沉淀管，观察是否出现颗粒，滴加时间要求持续2分钟。

(7) 加入1ml的1640液，边加边摇动，持续1分钟。

(8) 重复第(7)步一次。

(9) 加入1ml的1640液，边加边摇动，持续0.5分钟。

(10) 再次重复第(9)步。

(11) 加入15ml的1640液。

(12) 在室温下，以400g的离心力离心1分钟，使细胞沉淀。

(13) 去除上清，轻轻敲击管底，加入25ml含有HAT的完全1640液。

(14) 将融合的细胞液每孔滴加到前一天种有饲养细胞的40孔塑料培养盘中，每孔1滴（约0.05ml）。

(15) 轻轻摇匀后，将其置于5% CO₂饱和湿度的37℃恒温箱中培养。

(16) 在第3、6、9、10天更换含HAT的完全1640培养液，注意轻吸取上清液，避免将固定在孔底的细胞吸出。如有需要，可适量加入饲养细胞。

(17) 在第12、15天加入含有HAT的完全1640培养液。每次换液前需用倒置显微镜观察，约需10天便可观察到杂交瘤细胞的生长。大多数杂交瘤细胞在10~20天内出现，但有些可能需要1个月左右。在杂交瘤细胞出现后，需吸取上清液并检查抗体。

(18) 对于继续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在传代过程中，视情况可取消HAT液和完全1640液，改用10% FCS-1640液。同时进行液氮保存和克隆化，每代都需检查抗体以防止抗体细胞的变异和丢失。

借助尊龙凯时的细胞融合技术，科研人员可以在生物医学研究中更高效地开发新型抗体，为临床应用提供坚实的基础。